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DiI,DiO,DiD,DiR是一系列亲脂性的荧光染料，可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。这些环境敏感性荧光染料在进入细胞膜之前荧光非常弱，当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强。且具有消光系数高、极性依赖性、激发态寿命短等特点。一旦进入细胞膜后，可在整个细胞膜上扩散，最佳浓度时可以使整个细胞膜染色。

• DiO和DiI可分别用标准的FITC滤光片和TRITC滤光片检测。
  
• DiD是DiI的衍生物，DiD受到633nm He-Ne激光的激发，具有明显往红光迁移的激发和发射光谱，这一特性使其特别适合标记具显著自荧光效应的细胞或组织。
  
• DiR具强效的近红外光穿透细胞或组织，并在近红外区具较低的自荧光水平，这些特性使其特适用于体内成像或示踪实验等。

英文别名	DiIC16(3) perchlorate;1,1-Dihexadecyl-3,3,3,3-tetramethylindocarbocyanine perchlorate
分子量	877.76
外观	红色粘性固体
光谱特性	Ex/Em=549/565nm
推荐滤光器	XF32-Omega,31002-Chroma
纯度	≥95%(HPLC)
溶解性	溶DMSO
结构式

• 染色液制备
  
  • 配置DMSO或EtOH储存液：储存液用DMSO或EtOH配置浓度1～5mM。
    注：未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融。
    
  • 工作液制备：用合适的缓冲液(如：无血清培养基，HBSS或PBS)稀释储存液，配制浓度为1～5μM的工作液。
    注：工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。
• 悬浮细胞染色
  
  • 加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×10⁶/mL。
    
  • 37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
    
  • 孵育结束，按1000～1500rpm离心5min。
    
  • 倾倒上清液，再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。
    
  • 重复步骤3和4两次以上。
• 贴壁细胞的染色
  
  • 将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
    
  • 从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。
    
  • 在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
    
  • 37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
    
  • 吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10min，然后吸干培养基。
• 显微镜检测
  
  • DiD，DiO，DiI，DiR和DiS滤光器的选择参见下表。
    

    产品名称	货号	分子量	Ex/Em	推荐滤光器
    DiO	SY0560	881.7	484/501nm	XF23-Omega,31001-Chroma
    DiI	SY0494	933.87	550/567nm	XF32-Omega,31002-Chroma
    DiD	SY0585	959.91	644/663nm	XF47-Omega,31023-Chroma
    DiR	SY0584	1013.4	748/780nm	XF112-Omega,41009-Chroma

  • 多色染料的同时检测，滤光器按照以下设定：
    
    • DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；
      
    • DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；
      
    • DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005。